PCR 마스터믹스 계산기
PCR Master Mix Calculator
반응 수·overage(여유분)에 맞춰 마스터믹스 조성과 물 보정량을 자동 계산하고, 물부터 넣는 복사용 한국어 피펫팅 프로토콜까지 생성합니다. 2× 프리믹스·커스텀(C1V1=C2V2)·U/rxn 효소를 지원하며 서버 전송 없이 브라우저에서만 계산합니다.
반응 조건
여분 계산 — 총량에만 반영되고 반응당 부피는 변하지 않습니다.
시약 구성
| 포함 | 시약 | Stock | Final / 목표 | 효소 | 삭제 |
|---|---|---|---|---|---|
물(Nuclease-free water)은 최종 부피에 맞춰 자동으로 채워집니다 — 직접 입력하지 않습니다.
— 연구용(RUO) · 브라우저에서만 계산 · 서버 전송 없음
소개
PCR 마스터믹스 계산기는 반응 수·최종 반응 부피·overage(여유분)를 입력하면 각 시약의 반응당·총량 부피를 C1V1=C2V2로 계산하고, 물(Nuclease-free water)을 최종 부피에 맞춰 자동으로 보정합니다. 2× 프리믹스와 커스텀 구성(버퍼·MgCl₂·dNTP·프라이머·중합효소)을 모두 지원하며, 효소는 U/rxn ÷ U/µL 단위 기반으로 계산합니다. qPCR 반응 계산과 RT-PCR 반응 조성, 프라이머 희석까지 한 화면에서 처리하고, 물부터 넣는 순서의 복사용 한국어 피펫팅 프로토콜을 생성해 연구노트나 배치 로그에 바로 붙여넣을 수 있습니다. 모든 계산은 브라우저에서만 수행되며 서버로 전송되지 않습니다.
V = (C_final × V_reaction) / C_stock · Water = V_rxn − V_template − ΣV · Total = 반응당 × 반응수 × (1 + overage%/100)효소는 V = 목표(U/rxn) ÷ stock(U/µL)로 별도 계산합니다. 모든 값은 전체 정밀도로 계산하고 반올림은 표시·내보내기 단계에서만 적용되어 총량에 반영되지 않습니다(±0.01 µL).
예시
- 2× 프리믹스 (template 개별 첨가)·최종 25 µL · 24 반응 · overage 10% · 2× 믹스(1×) · 프라이머 10 µM→0.2 µM · 주형 1 µL → 2× 믹스 12.5 · 프라이머 각 0.5 · 물 10.5 µL/rxn · 분주 24.0 µL · 총량은 26.4 반응분
- 커스텀 구성 (단위 변환 + 효소)·최종 20 µL · 96 반응 · buffer 10×→1× · MgCl₂ 25 mM→2 mM · dNTP 10 mM→0.2 mM · primer 10 µM→0.4 µM · 중합효소 5 U/µL, 1 U/rxn → 2.0 / 1.6 / 0.4 / 0.8 / 0.2 · 물 13.0 µL/rxn · 분주 18.0 µL
- 물 음수 방지 (blocking)·시약 부피의 합이 반응 부피를 초과 → 물이 음수가 되어 레시피 생성이 차단됩니다(stock 농도 재확인)
자주 묻는 질문
- overage(여유분)는 무엇이고 왜 필요한가요?
- 피펫팅 손실로 마지막 well이 부족해지는 것을 막기 위해 실제 반응 수보다 조금 더 많이 준비하는 여유분입니다. overage는 총량(total)에만 반영되고 반응당 부피는 변하지 않습니다. 일반적으로 5–10%를 권장하며, %와 '추가 반응 수' 두 방식을 지원합니다.
- 주형 DNA를 '믹스 포함(included)'과 '개별 첨가(separate)' 중 무엇으로 해야 하나요?
- 교차오염을 줄이기 위해 주형은 분주 후 개별 첨가(separate)가 기본이며 권장됩니다. 이 경우 물 보정식은 Water = V_rxn − 주형 − Σ시약이 되고, 믹스 포함(included)으로 바꾸면 주형이 마스터믹스에 들어가 물 보정식이 자동으로 바뀝니다. 계산기가 두 식을 자동 전환하므로 수동 보정이 필요 없습니다.
- 프라이머 부피가 0.5 µL 미만으로 나오는데 괜찮나요?
- 실행은 가능하지만 sub-µL 피펫팅은 정밀도가 떨어져 technical replicate 간 편차(CV)를 키울 수 있습니다. 계산기가 0.5 µL 미만 시약을 경고로 표시합니다. 중간 희석(intermediate dilution) stock을 만들어 반응당 부피를 키우는 것을 권장합니다.
- 중합효소 같은 효소는 왜 농도가 아니라 U/rxn로 입력하나요?
- polymerase·역전사효소는 U/µL(활성 단위/부피)로 공급되고 U/rxn(반응당 활성 단위)로 투입하므로, 농도 기반 C1V1=C2V2가 성립하지 않습니다. 계산기는 효소 항목을 V = 목표 U/rxn ÷ stock U/µL로 별도 계산합니다.
- '물이 음수'라고 나오는데 무슨 뜻인가요?
- 시약 부피의 합이 반응 부피(또는 개별 첨가 시 반응 부피 − 주형)를 초과했다는 뜻으로, 물리적으로 불가능한 구성입니다. 대개 stock 농도를 실제보다 낮게 입력했을 때 발생합니다. 이 경우 레시피·프로토콜·내보내기가 모두 차단되며, stock 농도와 최종 부피를 다시 확인하면 해결됩니다.